1 Ievads
Liekais svars un aptaukošanās ir kļuvušas par globālām veselības problēmām, un tās ir cieši saistītas ar koronāro sirds slimību, hipertensiju un vielmaiņas traucējumiem. Esošie farmaceitiskie hipolipidēmiskie un hipoglikēmiskie līdzekļi bieži uzrāda blakusparādības, kas izraisa interesi par drošām, dabīgām alternatīvām glikozes un lipīdu regulēšanai asinīs.
Jūraszāles, augļi un dārzeņi ir bagāti ar aktīviem savienojumiem ar pretiekaisuma, lipīdus{1}}pazeminošām un hipoglikēmiskām īpašībām.Sargassum fusiformeparāda antioksidantu un svara{0}}kontroles aktivitāti; kurkumīns var modulēt lipīdu metabolismu; punikalagīnam piemīt pretiekaisuma un lipīdus{2}}pazeminoša iedarbība. Šo dabisko aktīvo vielu -glikozidāzes un aizkuņģa dziedzera lipāzes inhibitoru skrīnings nodrošina pamatu dabisko hipoglikēmisko un hipolipidēmisko palīgformulāciju izstrādei.
2 Materiāli un metodes
2.1 Materiāli un reaģenti
Sargassum fusiforme, kurkumīns, punikalagīns, -glikozidāze, cūku aizkuņģa dziedzera lipāze, PNPG, 4-MUO un standarta inhibitori (akarboze un orlistats).
2.2 Instrumenti
Tika izmantots saldētavas žāvētājs, rotācijas iztvaicētājs, atdzesēta centrifūga, nemainīgas-temperatūras inkubators, mikroplašu lasītājs un īpaši tīra ūdens sistēma.
2.3. Eksperimentālās metodes
2.3.1. Sargassum fusiforme ūdens ekstrakta sagatavošana
Hidratētās jūraszāles ekstrahēja ar cietās un šķidruma attiecību 1:50, karsēja 85 grādu temperatūrā 6 stundas, centrifugēja un žāvēja liofilizētā veidā, lai iegūtu ūdens ekstraktu.
2.3.2 -Glikozidāzes inhibīcijas tests
Inhibējošās aktivitātes noteikšanai tika izmantota PNPG kolorimetriskā metode.
2.3.3. Aizkuņģa dziedzera lipāzes inhibīcijas tests
4-MUO kalpoja par substrātu, un, lai aprēķinātu inhibīcijas līmeni, tika mērīta fluorescences intensitāte.
2.3.4. Viena-faktora eksperimenti
Pamatojoties uz trīs aktīvo vielu IC50 attiecībām (150:6:2), tika izvēlēts masas attiecību diapazons. Pie 0,5 mg/ml kopējās koncentrācijas katrai attiecībai tika noteikti inhibīcijas rādītāji pret abiem enzīmiem.
2.3.5. Reakcijas virsmas dizains
Trīs{0}}faktoru, trīs-līmeņu RSM dizains novērtēja trīs sastāvdaļu attiecību ietekmi uz enzīmu inhibīciju, lai noteiktu optimālo salikto formulu.
3 Rezultāti un analīze
3.1. IC₅₀ vērtību salīdzinājums
Punikalagīnam bija visspēcīgākā inhibējošā aktivitāte:
-glikozidāze:IC₅₀=0.420 mg/ml
Aizkuņģa dziedzera lipāze:IC₅₀=0.090 mg/ml
Kurkumīnam bija mērena aktivitāte, savukārtSargassum fusiformeekstrakts uzrādīja vājāku inhibīciju (IC₅₀=38.22 mg/mL un 1,02 mg/mL).
Vidējā IC50 attiecība bija aptuveni150:6:2.
3.2. Viena-faktora eksperimenti
3.2.1. Sargassum fusiforme ekstrakta attiecība
-glikozidāzes inhibīcija samazinājās līdz ar lielākām proporcijām, bet aizkuņģa dziedzera lipāzes inhibīcija sasniedza maksimumu ar attiecību 450. Izvēlētā optimālā attiecība bija450.
3.2.2. Kurkumīna attiecība
-glikozidāzes inhibīcija bija visaugstākā ar attiecību 4, un aizkuņģa dziedzera lipāzes inhibīcija sasniedza maksimumu pie 6. Optimālā kurkumīna attiecība tika noteikta4.
3.2.3. Punikalagina attiecība
Fiksētos apstākļos (450 Sargassum: 4 kurkumīns) pakāpeniska punikalagīna palielināšanās ļāva noteikt optimālo attiecību ap2, veidojot RSM analīzes pamatu.
3.3. Atbildes virsmas analīze un optimizācija
RSM parādīja trīs sastāvdaļu ietekmi uz enzīmu inhibīciju, kas sakārtota šādi:
-glikozidāzei:
kurkumīns > punikalagīns > Sargassum ekstrakts
Aizkuņģa dziedzera lipāzei:
kurkumīns > Sargassum ekstrakts > punikalagīns
Modeļa optimizācija radīja ideālu masas attiecību:
150:6:3 (Sargassum ekstrakts: kurkumīns: punikalagīns)
Izmērītie inhibīcijas rezultāti bija:
-glikozidāze:47.77%
Aizkuņģa dziedzera lipāze:74.18%
Vērtības cieši saskanēja ar modeļa prognozēm, apstiprinot modeļa uzticamību.
3.4. Optimizētās formulas enzīmu inhibīcija
Optimizētā saliktā formula uzrādīja šādas IC₅₀ vērtības:
0,56 mg/ml-glikozidāzei
0,210 mg/mlaizkuņģa dziedzera lipāzei
Tie bija ievērojami spēcīgāki par tiemSargassum fusiformeatsevišķi, norādot uz sinerģisku uzlabošanos pēc kombinācijas.
4 Diskusija
Katrai no trim aktīvajām sastāvdaļām ir atzīta hipoglikēmiskā un hipolipidēmiskā iedarbība, un saliktā formula demonstrē sinerģisku aktivitāti. Optimizētais dabīgais sastāvs ir drošs, un tam ir liels potenciāls attīstīties par funkcionālu pārtiku, kas paredzēta glikozes un lipīdu regulēšanai asinīs. Tomēr tālākin vivoturpmākai produktu attīstībai ir nepieciešami pētījumi un normatīvo prasību ievērošana.
